© Шарова Наталья Петровна
− зав. лаб. биохимии процессов онтогенеза, д.б.н., зам. дир. по научной работе. Область научных интересов: протеасомы в развитии иммунной и центральной нервной систем и при малигнизации.
© Карпова Ярослава Дмитриевна − научный сотрудник той же лаборатории, к.б.н. Область научных интересов: протеасомы в развитии иммунной системы и клеточной малигнизации.
Функционирование белков лежит в основе практически всех биологических процессов, а отклонения приводят к дисбалансу или же остановке работы систем в целом. Одним из наиболее эффективных методов исследования, которые находится в руках ученых – биологов в наше время, является удаление отдельных белков и наблюдение за дальнейшими изменениями. Для этого используют два основных метода – подавления экспрессии белка с помощью РНК-интерференции или же редактирование соответствующего кодирующего участка ДНК с помощью направленной модификации генома. Однако эти методы влияют на белок опосредованно, работают не во всех типах клеток и, как правило, небыстры.
Авторы статьи, вышедшей пока в виде электронного препринта в журнале "Cell", предлагают новый метод "Trim-Away". Это "выстригание" позволяет быстро устранять эндогенные белки без предварительной модификации генома или мРНК. Игра слов в названии метода основана на существовании цитоплазматического рецептора антител TRIM21, который является Е3-убиквитин-лигазой, с высоким сродством связывающейся с Fc-доменом антител. Убиквитинированные антитела в сцепке с белками распознаются 26S-протеасомами и в них расщепляются.
Разработанный метод Trim-Away имеет ряд важных преимуществ:
- проходит быстро, в течении нескольких минут, что позволяет исследовать истинный биологический процесс, исключая компенсаторные механизмы и аккумуляции неспецифических эффектов;
- высокоспецифичность, которая определяется использованием антител;
- проходит в любых типах клеток, даже неделящихся и находящихся в состоянии покоя;
- позволяет работать практически с любыми, даже долгоживущими, белками;
- возможно использование антител, которые уже имеются в лаборатории.
К недостаткам можно отнести не самый простой способ доставки комплекса в клетки, используемый в работе – электропорацию, что также не дает возможности использовать метод in vivo. Кроме того, необходимо быть уверенным в высокоспецифичности антител и отсутствии кроссреактивности к другим белкам в клетке.
Новость подготовили © 2017 Шарова Н.П., Карпова Я.Д.
08.12.2017